质粒小量制备试剂盒(1～4mL)

产品货号：

YL0080

中文名称：

质粒小量制备试剂盒(1～4mL)

英文名称：

Plasmid mini preparation kit

产品规格：

50T|250T

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本试剂盒采用改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的方法达到快速纯化质粒DNA的目的。适合从1～4mL细菌培养物中提取多至20μg高纯的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。

组分	50T	250T	说明
Buffer S1	15mL	75mL	细菌悬浮液
Buffer S2	15mL	75mL	细菌裂解液
Buffer S3	21mL	105mL	中和液
Buffer W1	28mL	145mL	洗涤液
Buffer W2	24mL	2×72mL	去盐液
Eluent	5mL	25mL	洗脱液
RNase A(50mg/mL)	30μL	150μL
Miniprep column	50个	250个
2mL Microfuge tube	50个	250个
1.5mL Microfuge tube	50个	250个

保存：室温，有效期一年。其中RNase A室温可保存6个月，长期保存置于-20℃。

注意事项

Buffer W2使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇）。混合均匀，室温密闭贮存。
Buffer S1加入RNaseA后，混合均匀，4℃贮存。
Buffer S2 Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要带乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时取医院救治。

第一次使用前，RNase A全部加入到Buffer S1中，4℃保存。
准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
第一次使用前，在Buffer W2中加入指定体积的无水乙醇，并做好标记。
使用前检查Buffer S2是否出现沉淀，应于37℃温浴加热溶解并冷却至室温后再使用。

取1～4mL在LB培养基中过夜培养的菌液(若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少)，在12000g离心1min，弃尽上清。
加入250μL Buffer S1悬浮细菌沉淀，虚浮需均匀，不应留下晓得菌块。
注：确认Buffer S1中已加入RNase A。
加入250μL Buffer S2，温和并充分地上下翻转4～6次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。
注：
① Buffer S2使用后立即盖紧瓶盖，以免空气中的CO₂中和Buffer S2中的NaOH，降低溶菌效率。
② 避免剧烈摇晃，否则可能导致基因组DNA的污染。
③ 此步骤不宜超过5min。
加入350μL Buffer S3，温和并充分地上下翻转混合6～8次，12000g离心10min。
注：避免剧烈摇晃，否则可能导致基因组DNA的污染。
纯化质粒DNA
- 负压法
  - 将质粒DNA制备管插到负压装置的接口上。吸取步骤4中的离心上清并转移到制备管中，开启并调节负压至-25～-30英寸汞柱，缓慢吸走管中的溶液。
  - 加入500μL Buffer W1，吸尽管中溶液。
  - 加700μL Buffer W2，吸尽管中溶液。
    注：确认在Buffer W2中已加入指定量的无水乙醇。
  - 重复1次步骤c。
    注：两次冲洗能确保盐分被完全清除，消除对酶切反应的影响。
  - 将制备管置于2mL离心管中，12000g离心1min。
- 离心法
  - 吸取步骤4中的离心上清并转移到制备管（置于2mL离心管中），12000g离心1min，弃滤液。
  - 将制备管放回离心管，加500μL Buffer W112000g离心1min，弃滤液。
  - 将制备管放回离心管，加700μL Buffer W212000g离心1min，弃滤液。
    注：确认在Buffer W2中已加入指定量的无水乙醇。
  - 重复1次步骤c。
    注：两次冲洗能确保盐分被完全清除，消除对酶切反应的影响。
  - 将制备管放回2mL离心管中，12000g离心1min。
将制备管移入新的1.5mL离心管中，在制备管膜中央加60～80μL Eluent或去离子水，室温静置1min。12000g离心1min。
注：将Eluent或去离子水加热至65℃将提高洗脱效率。

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